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    河北11选5的ToP10遗漏:PET塑胶原料表面处理方法上的一些改善

    发布时间:2013-05-25    文章来自:

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    方法: 1.细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105至8×105 细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。 2.制备PEI-DNA混合物:以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。准备两支1.5mL离心管,一管将质粒DNA(总量2-8μg为佳)加入240μLHBS中,混匀。另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混匀后室温静置20-30min。最后将这420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层
    细胞的细胞培养基中,轻轻摇动平皿混匀,置于含5%~7%CO2的37℃温箱孵育。

    注:每次用100μM的PEI储存液前都需要先将其充分混匀,保证所取的浓度一致。

    3.培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基,继续培养,16h左右 可以观测到报告基因的表达。

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